PCR edo polimerasaren kate erreakzioa DNA sekuentziak anplifikatzeko erabiltzen den teknika bat da.1980ko hamarkadan garatu zuen Kary Mullis-ek, eta 1993an Kimikako Nobel Saria jaso zuen bere lanagatik.PCR-k biologia molekularra irauli du, ikertzaileei lagin txikietatik DNA handitu eta zehatz-mehatz aztertzeko aukera emanez.
PCR hiru urratseko prozesu bat da, ziklogailu termiko batean egiten dena, erreakzio-nahaste baten tenperatura azkar alda dezakeen makina bat.Hiru urratsak desnaturalizazioa, annealing eta luzapena dira.
Lehen urratsean, desnaturalizazioan, hari bikoitzeko DNA tenperatura altura berotzen da (normalean 95 °C inguruan) bi kateak elkarrekin eusten dituzten hidrogeno-loturak hausteko.Honek kate bakarreko bi DNA molekula sortzen ditu.
Bigarren urratsean, annealing, tenperatura 55 °C ingurura jaisten da, abiarazleek kate bakarreko DNAren sekuentzia osagarrietara hel daitezen.Primerak DNA zati laburrak dira, xede-DNAren intereseko sekuentziak bat etortzeko diseinatuta daudenak.
Hirugarren urratsean, luzapenean, tenperatura 72 °C ingurura igotzen da Taq polimerasak (ADN polimerasa mota bat) abiarazteetatik DNA kate berri bat sintetiza dezan.Taq polimerasa iturri beroetan bizi den eta PCRn erabiltzen diren tenperatura altuak jasateko gai den bakterio batetik eratorria da.
PCR ziklo baten ondoren, emaitza helburuko DNA sekuentziaren bi kopia dira.Hiru urratsak ziklo batzuetan errepikatuz (normalean 30-40), xede-DNA-sekuentziaren kopia-kopurua esponentzialki handitu daiteke.Horrek esan nahi du hasierako DNAren kopuru txiki bat ere handitu daitekeela milioika edo are milioika kopia ekoizteko.
PCRk aplikazio ugari ditu ikerketan eta diagnostikoan.Genetikan erabiltzen da geneen eta mutazioen funtzioa aztertzeko, auzitegietan DNA frogak aztertzeko, gaixotasun infekziosoen diagnostikoan patogenoen presentzia detektatzeko eta jaio aurreko diagnostikoan fetuaren nahaste genetikoak aztertzeko.
PCR hainbat aldaeratan erabiltzeko ere egokitu da, hala nola, PCR kuantitatiboa (qPCR), DNA-kopurua neurtzeko eta alderantzizko transkripziorako PCR (RT-PCR), RNA sekuentziak anplifikatzeko erabil daitekeena.
Aplikazio ugari izan arren, PCRk mugak ditu.Helburu-sekuentzia eta abiarazle egokien diseinua ezagutzea eskatzen du, eta akatsetarako joera izan daiteke erreakzio-baldintzak behar bezala optimizatzen ez badira.Hala ere, diseinu eta exekuzio esperimental zainduarekin, PCR biologia molekularreko tresnarik indartsuenetako bat izaten jarraitzen du.
Argitalpenaren ordua: 2023-02-22